Вы вошли как ГостьПриветствую Вас, Гость
Главная » 2014 » Февраль » 11 » Проявление хроматограмм при тонкослойной хроматографии.
21:23
Проявление хроматограмм при тонкослойной хроматографии.


При тонкослойной хроматографии очень важным моментом является проявление полученной хроматографии, так как, большинство веществ не окрашены и различить их человеческим взглядом невозможно. Существуют автоматические системы записи результатов хроматографии на электронные носители. Их работа основана на принципе сканирования поверхности пластинки (как в обычном компьютерном сканере). При этом, сканирование производится в той части спектра (обычно, ультрафиолет) в которой данные соединения видны для электронного датчика. Результаты сканирования записываются в ЭВМ, при этом, учитывается интенсивность каждого пятна, его точное расположение. Программы ЭВМ производят подсчет средней длины пробега каждого соединения и вычисляют его концентрацию в исходной смеси.

Подобное оборудование стоит на порядок больше, чем обычный сканер и не всегда есть под рукой. Поэтому, стоит рассмотреть более кустарные методы проявления (для анализа и наглядного пособия) хроматограмм на тонкослойном носителе.

Прежде всего, многие соединения легко обугливаются или изменяют цвет при нагревании, например, высшие диазо- и тетразосоединения, некоторые полимеры, углеводы. При нагревании пластинки в течение 0,2-2 часов до температуры 120-150*С, происходит проявление пятен. Этот метод удобен далеко не всегда и имеет низкую чувствительность. Для его модификации можно предварительно обработать поверхность носители концентрированной серной кислотой, в том числе с добавлением бихроматов или 2-10% концентрированной азотной кислоты. При этом наблюдается окисление органических соединений (и ряда неорганических) и проявление хроматограммы при нагревании.

Так же, весьма универсальным методом, отличающимся высокой чувствительность, является обработка пластинки парами йода. Для этого пластинку помещают в стеклянную камеру с парами йода (в камере находится несколько кристалликов йода). Йод сорбируется на носителе не равномерно, из-за наличия на отдельных участках органических компонентов. Кроме того, многие соединения вступают в реакцию с йодом, в результате которых соединения меняют цвет. Этот метод весьма удобен тем, что не приходится обрабатывать пластинку жидкостью, что приводит к размыванию мелких пятен и снижает прочность плохо сшитого слоя носителя. Если йод не вступает с соединениями в реакции, тогда, процесс обратим и при сушке или выдерживании на воздухе, йод улетучивается и хроматограмма тускнеет.

Другой, очень универсальный метод анализа хроматограмм заключается в ультрафиолетовом облучении пластинки. В зависимости от глубины и плотности залегания веществ в слое носителя, подбирают оптимальную интенсивность облучения и ракурс (угол освещения). Многие органические соединения интенсивно поглощают ультрафиолетовое излучение, в отличие от минеральной фазы носителя. Некоторые соединения напротив, флюоресцируют (светятся) в УФ облучении. Этот метод хорош для больших концентраций веществ в носителе и/или высокой световой активности соединений.

Для проявления отдельных типов соединений используются специальные реагенты, которые так же наносят при помои распылителя.

Для проявления жиров и других высших эфиров используют 0,2% раствор 2,7-дихлор-флуоресцеина (можно производную с бромом). При ультрафиолетовом облучении пластинки после высушивания, появляются желтые флуоресцентные пятна на темном фоне.

Стероиды, витамины, липиды, каротеноиды и другие алкалоиды и сложноэфирные соединения проявляются при обработке пластинки насыщенным раствором хлорида сурьмы (SbCl3) в хлороформе. Так же, используют 50% раствор хлорида сурьмы в ледяной уксусной кислоте или 25% раствор сульфида сурьмы в четыреххлористом углероде.

Для проявления пятен карбоновых кислот проще всего использовать водные или водно-спиртовые растворы индикаторных красителей. Для большей заметности границы пятен, раствор индикатора слегка подщелачивают (количество щелочи зависит от силы кислот, концентрации раствора и интервала рН перехода окраски). После обработки появляются цветные пятна на цветном фоне.

Фенольные и енольные соединения достаточно четко проявляются при обработке пластинки слабым раствором (0,2 – 2%) треххлористого железа в воде.

Аминокислоты, аминосахара, аминофосфатиды и другие сложные соединения с аминогруппами появляются при обработке пластинки 0,3% раствором нингидрина в н-бутаноле. Для повышения эффективности, в раствор добавляют 3% уксусной кислоты и нагревают 10 минут до 125*С. Появляются пятна различных оттенков голубого цвета.

Альдегиды и кетоны проявляются при обработке пластинки 0,5% раствором 2,4-динитрофенилгидразина в 2Н соляной кислоте. Пятна от красного до желтого цвета, различных оттенков.

Для проявления углеводов рекомендуется применять анисовый альдегид. Для этого готовят смесь 0,5 мл анисового альдегида смешивают с 0,5 мл концентрированной серной кислоты и разбавляют 9 мл 95% этанола. Для повышения эффективности добавляют несколько капель концентрированного уксуса. После обработки из пульверизатора пластинку нагревают до 105*С в течение 20-30 минут. Проявляются пятна различных оттенков голубого цвета.

Алкалоиды и органические основания определяют при помощи Реагента Драгендорфа. Для его приготовления смешивают 1,7 гр. BiONO3 со 100 мл смеси воды и ледяного уксуса (в отношении 80 мл к 20 мл). Второй раствор составляют из 40 гр. иодида калия и 100 мл воды. Смешивая 5 мл первого раствора и 5 мл второго раствора с раствором 20 мл уксусной кислоты в 70 мл воды, получают рабочий раствор. После обработки появляются оранжевые пятна.

Для проявления неорганических катионов используют 8-оксихинолин. В начале выдерживают хроматограмму в парах аммиака, затем обрабатывают 0,5% раствором 8-оксихинолина в 60% этаноле и облучают УФ. Проявляются цветные пятна.

Для проявления ионов галогенов используют смесь нитрата серебра и флуоресцеина. В начале обрабатывают пластинку 1% раствором нитрата серебра с в воде, затем 0,1% раствором флуоресцеина в этаноле.

Все жидкие реактивы наносят на пластинки только пульверизатором, небольшие количества удобно наносить при помощи шприца с укороченным и расплющенным носиком иглы. При нанесении необходимо добиться образования минимального размера капель. Лучше, если реактив будет оседать на поверхность пластинки в виде тумана. Работы с растворителями проводить в тяге.

Категория: Очистка и выделение веществ | Просмотров: 2962 | Добавил: Chemadm | Теги: тонкослойная хроматография, проявление хроматограмм, пластинки для хроматографии, проявители | Рейтинг: 4.9/8
Всего комментариев: 0
Добавлять комментарии могут только зарегистрированные пользователи.
[ Регистрация | Вход ]